分析化學(xué)提取凈化之（一）氮吹儀，固相萃取儀的使用

引言

分析化學(xué)是人們獲得物質(zhì)化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)信息的科學(xué)，它是研究物質(zhì)化學(xué)組成的表征和測量的科學(xué)，是化學(xué)學(xué)科的重要分支，它所解決的問題是物質(zhì)是什么組分組成的，這些組分在物質(zhì)中是如何存在的，以及各組分的含量有多少。

分析化學(xué)是研究物質(zhì)及其變化規(guī)律的重要方法之一，它在人們的生活生產(chǎn)中發(fā)揮著重要的作用。

1分析化學(xué)與食品安全

2009年2月28日第十一屆全國人民代表大會常務(wù)委員會第七次會議通過了《中華人民共和國食品安全法》，以此保證食品安全，保障公眾身體健康和生命安全。食品安全是一個相對的概念，所謂不安全的食品就是指人們食用以后出現(xiàn)的各種不適感覺或者長期積累引起某些異常的代謝。

利用分析化學(xué)手段對食品的成分、性質(zhì)等進(jìn)行測定是分析化學(xué)的一大類應(yīng)用，更是食品安全的有效保障。2008年的奶粉事件一方面充分暴露出我國在食品安全上的漏洞，另一方面也必將推動分析化學(xué)的繼續(xù)發(fā)展。

三聚氰胺（Melamine），是一種三嗪類含氮雜環(huán)有機(jī)化合物，重要的氮雜環(huán)有機(jī)化工原料。目前，三聚氰胺被認(rèn)為毒性輕微。但動物長期攝人三聚氰胺會造成zhengzhi、泌尿系統(tǒng)的損害，膀胱、腎部結(jié)石，并可進(jìn)一步誘發(fā)膀胱癌。對于原料乳與乳制品中三聚氰胺含量的測定，標(biāo)準(zhǔn)《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》（GB/T 22388-2008）中選用了液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法。

方法：液相色譜法測定原料乳與乳制品中三聚氰胺含量

1.1原理

用三lu乙suan溶液-乙腈提取試樣，經(jīng)陽離子交換固相萃取柱凈化后，用液相色譜測定，外標(biāo)法定量。

1.2試劑與材料

甲醇、乙腈、25％～28％的氨水、三lu乙suan、檸檬suan、辛烷磺suan鈉、甲醇水溶液（含50mL甲醇和50mL水）、三lu乙suan溶液（1％）、氨化甲醇溶液（5％）、離子對試劑緩沖液（由檸檬suan和辛烷磺suan鈉配制）、三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品（CAS108-78-01，純度＞99.0%）、三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1mg/mL）。所有試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。陽離子交換固相萃取柱、定性濾紙、海砂、微孔濾膜、氮氣（純度≥99.999％）

1.3儀器和設(shè)備

液相色譜（HPLC）儀、分析天平、離心機(jī)、超聲波水浴器、固相萃取裝置、氮氣吹干儀、渦旋混合器、50mL具塞塑料離心管、研缽

1.4樣品處理

1.4.1提取

①液態(tài)奶、奶粉、suan奶、冰淇淋和奶糖等。

稱取2g（至0.01g）試樣于50mL具塞塑料離心管中，加入15mL三lu乙suan溶液和5mL乙腈，超聲提取10min，再振蕩提取10min后，以不低于4000r/min離心10min。上清液經(jīng)三lu乙suan溶液潤濕的濾紙過濾后，用三lu乙suan溶液定容至25mL，移取5mL濾液，加入5mL水混勻后做待凈化液。

②奶酪、奶油和巧克力等。

稱取2g（至0.01g）試樣于研缽中，加入適量海砂（試樣質(zhì)量的4倍～6倍）研磨成干粉狀，轉(zhuǎn)移至50mL具塞塑料離心管中，用15mL三lu乙suan溶液分?jǐn)?shù)次清洗研缽，清洗液轉(zhuǎn)入離心管中，再往離心管中加入5mL乙腈，超聲提取10min，再振蕩提取10min后，以不低于4000r/min離心10min。上清液經(jīng)三lu乙suan溶液潤濕的濾紙過濾后，用三lu乙suan溶液定容至25mL，移取5mL濾液，加入5mL水混勻后做待凈化液。

若樣品中脂肪含量較高，可以用三lu乙suan溶液飽和的正己烷液-液分配除脂后再用SPE柱凈化。

1.4.2凈化

將待凈化液轉(zhuǎn)移至固相萃取柱中。依次用3mL水和3mL甲醇洗滌，抽至近干后，用6mL氨化甲醇溶液洗脫。整個固相萃取過程流速不超過1mL/min。洗脫液于50℃下用氮氣吹干，殘留物（相當(dāng)于0.4g樣品）用1mL流動相定容，渦旋混合1min，過微孔濾膜后，供HPLC測定。

1.5液相色譜測定

1.5.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

用流動相將三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液逐級稀釋得到的濃度為0.8、2、20、40、80μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，濃度由低到高進(jìn)樣檢測，以峰面積-濃度作圖，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。

1.5.2定量測定

待測樣液中三聚氰胺的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，超過線性范圍則應(yīng)稀釋后再進(jìn)樣分析。

1.6空白實驗

除不稱取樣品外，均按上述測定條件和步驟進(jìn)行。

本方法的定量限為2mg/kg。在添加濃度2mg/kg～10mg/kg濃度范圍內(nèi)，回收率在80%～110%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的差值不得超過算術(shù)平均值的10%。